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细胞基质金属蛋白酶(MMP-2)活性比色法定量检测试剂盒
时间:2023/2/22 点击次数:2261

细胞基质金属蛋白酶(MMP-2)活性比色法定量检测试剂盒产品说明书(中文版)主要用途细细胞基质金属蛋白酶(MMP-2)活性比色法定量检测试剂盒是一种旨在通过含硫多肽底物以及特定抑制剂存在与否的情况下,受到MMP2的水解,释放出巯基,进而使用Ellman试剂,产生黄色5-巯基-2-基苯甲酸产物吸光峰值的变化,即采用比色法来测定细胞裂解样品中酶活性的而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种细胞裂解萃取液样品(动物、人体)、部分或纯化酶样品中基质金属蛋白酶2的特异活性定量检测,以及抑制剂和激活剂的筛选。产品严格无菌,即到即用,操作简捷,性能稳定,安全可靠。技术背景细胞基质金属蛋白酶(MMP-2)活性比色法定量检测试剂是一类结构高度同源的分泌型或膜相关性锌内肽酶的总称,因含有金属(锌、钙)离子而得名。其功能在于分解细胞外基质成分。迄今为止发现的MMPs至少有28种,几乎能降解除多糖以外的全部细胞外基质(extracellular matrix)成分,同时参与胚胎发育、形态形成、胚泡植入(blastocyst)、血管形成、组织再吸收(tissue resorption)、疾病发生,例如关节炎、癌细胞浸入转移等。根据降解的底物不同可将MMPs分为4大类:(1)胶原酶:MMP1MMP8MMP13主要消化Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅶ、Ⅹ型胶原和蛋白多糖;(2)明胶酶(Ⅳ型胶原酶):MMP2MMP9,又称明胶酶AB,主要消化Ⅳ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ型胶原和弹性纤维;(3)基质溶解素:MMP3MMP7MMP16MMP11MMP12,主要作用于纤维粘连蛋白、层粘连蛋白、弹力纤维、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅸ胶原及MMP1MMP8MMP9;(4)膜型金属蛋白酶:MT1-MMPMT2-MMPMT3-MMP,主要作用于明胶、Ⅳ型胶原、MMP2体内绝大多数细胞并不储备MMPs,当需要MMPs的信号传递到细胞后才临时合成,合成的MMPs以无活性的酶原(proenzyme)形式分泌到细胞外,随后被多种蛋白酶和非蛋白酶水解以及热处理激活,一种激活的MMPs可激活另一种MMPs,形成瀑布效应。基质金属蛋白酶-2,又称明胶酶Agelatinase-A)或IV型胶原酶(type IV collagenase),其前体分子量为72kDa,激活后分子量为6256 kDa。它在血清或细胞上清中浓度通常为10200纳克/毫升。它的作用目标是天然和变性胶原蛋白(collagens)、纤维连接蛋白(fibronectin)、弹性纤维蛋白(elastin)、层粘连蛋白-5laminin-5)、前体肿瘤坏死因子-α(pro-TNF-α)和神经(蛋白)聚糖(neurocan)。基质金属蛋白酶-2与肿瘤发展与转移、血管形成、动脉粥样硬化等疾病有关。基于含硫多肽(thiopeptide)底物Ac-PLG2-mercapto-4-methyl-pentanoyl-LG-OC2H5,在特异性抑制剂OA-Hy存在与否的条件下,受到MMP2的水解,释放出巯基(sulfhydryl group),进而与Ellman试剂5,5-二硫基-2-硝基苯甲酸)[5,5’-dithiobis-2-nitrobenzoic acid);DTNB]反应后,产生黄色的5-巯基-2-硝基苯甲酸5-thio-2-nitrobenzoic acidTNB),通过其吸收峰值的变化(412nm波长),来定量测定细胞基质金属蛋白酶2的特异活性。基质金属蛋白酶2反应系统为:产品内容清理液(Reagent A毫升裂解液(Reagent B毫升缓冲液(Reagent C毫升反应液(Reagent D毫升

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